随着现代医药工业的进步，序列分析已成为蛋白质、多肽、抗体、疫苗类生物药物分子以及胶原蛋白等医疗器械类产品的研发和质量控制中的重要环节。蛋白质的全序列验证分析扮演关键角色，能够确认重组蛋白质多肽类生物制品的完整准确表达，确保产品质量和有效性。

百泰派克生物科技BTP基于CNAS/ISO9001双重质量认证体系，建立蛋白测序平台，该平台配备多台N端序列分析仪、超高效液相色谱高分辨质谱联用、经过多轮优化的蛋白从头测序算法平台。结合先进的分析设备和算法，BTP能够对蛋白质进行全序列验证分析，确保蛋白质的完整性和准确性，以满足您的研究和质量控制需求。

液质联用（LC-MS/MS）蛋白全序列验证分析:

蛋白全序列验证分析的一般流程是使用特异性蛋白酶对蛋白质分子进行酶解切割，酶解后的供试品是复杂的肽段组成的混合物，然后通过液质联用平台对供试品进行质谱分析。

首先，是对样本进行前处理，即根据蛋白全长理论氨基酸序列结合质谱级别蛋白酶酶切位点信息选择至少五种蛋白酶对蛋白进行酶切，提高酶切效率，以便获得更高的覆盖度。实际实验中可以从多种蛋白酶（Trypsin、Chymotrypsin、Asp-N、Glu-C、Lys-C和Lys-N等）中选择合适的蛋白酶或者组合酶切的方式对靶蛋白进行酶切；其次，使用液质联用Nano-LC-MS/MS 平台对酶切之后的肽段混合物进行分析，得到总离子流色谱图和质谱原始数据；然后，以所测定蛋白的理论序列建立本地数据库，通过专业分析软件匹配并计算每一种酶切之后鉴定到的肽段；利用酶切位点之间的互补性对蛋白序列进行拼接，最终实现蛋白全序列验证。

案例示意图:

抗体轻链全序列验证分析示意图

一般流程：

1、使用多种蛋白酶组合酶切的方式对蛋白进行酶切，提高酶切效率，以便获得蛋白每一个氨基酸的序列信息。

2、使用 Nano-LC-MS/MS 液质联用高分辨平台对样品进行分析。

3、将得到的质核比信息与理论序列建立的数据库进行比对。

4、拼接每种酶切方式鉴定到的肽段，得到蛋白是否完整正确表达的信息。

实验仪器:

• 液相色谱仪（Easy-nLC1200）
• 电喷雾-组合型四级杆-Orbitrap 质谱仪（Q Exactive™ HybridQuadrupole-Orbitrap™ Mass Spectrometer ）

应用:

• 蛋白质、多肽、抗体、疫苗、胶原蛋白等生物制品的氨基酸全序列验证分析
• 蛋白质翻译后修饰和化学修饰分析
• 蛋白质、多肽、抗体、疫苗、胶原蛋白等生物制品的氨基酸序列突变分析

常见问题:

问题1：覆盖度能反映什么问题呢？若覆盖度不足100%该怎么处理？

回答：覆盖度是指被测序到的序列占全序列大小的比率。反应了我们的测序结果对于我们蛋白的覆盖情况，若覆盖率为100%代表样品经酶解处理之后得到的序列与目标序列高度吻合，若覆盖率不足100%，我们会审查蛋白质数据和序列，查看缺失多少序列以及哪些理论上的肽段未检测到；根据实际结果判断是否继续使用现有方法和酶解处理，重新获得肽遗失的位置，还是蛋白样品本身发生了突变，需要进行从头测序分析。

问题2：想要进行测序的蛋白质分子量较小，如何进行蛋白样品制备？

回答：如果蛋白分子量比较小，可以使用浓度较高的SDS-PAGE胶将蛋白质进行分离，然后对蛋白胶进行考马斯亮蓝染色，再将与目的蛋白大小一致的蛋白条带切割下来，切下来的蛋白胶条用于质谱鉴定。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

4.七大质量控制检测平台，满足您一站式服务需求；

5.服务3000+企业，10000+客户的选择；

6.致力于为您提供优质的生物质谱分析服务!

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